GST-PI 유전자 조정을 위한 RNA 제제(RNA AGENTS FOR GST-PI GENE MODULATION)

(19) 대한민국특허청(KR)
(12) 공개특허공보(A)
(11) 공개번호 10-2017-0093988
(43) 공개일자 2017년08월16일
(51) 국제특허분류(Int. Cl.)
C12N 15/113 (2010.01) A61K 31/7105 (2006.01)
C07F 9/6533 (2006.01) C12Q 1/02 (2017.01)
G01N 33/58 (2006.01)
(52) CPC특허분류
C12N 15/1137 (2013.01)
A61K 31/7105 (2013.01)
(21) 출원번호 10-2017-7020901
(22) 출원일자(국제) 2015년12월28일
심사청구일자 없음
(85) 번역문제출일자 2017년07월25일
(86) 국제출원번호 PCT/US2015/067561
(87) 국제공개번호 WO 2016/106406
국제공개일자 2016년06월30일
(30) 우선권주장
JP-P-2014-266198 2014년12월26일 일본(JP)
(뒷면에 계속)
(71) 출원인
닛토덴코 가부시키가이샤
일본국 오사카후 이바라키시 시모호츠미 1-1-2
(72) 발명자
잉 웬빈
미국 92058 캘리포니아주 오션사이드 비아 델 몬
테 501
미노미 겐지로우
일본국 오사카후 이바라키시 시모호츠미 1-1-2 닛
토덴코 가부시키가이샤 나이
(뒷면에 계속)
(74) 대리인
특허법인코리아나
전체 청구항 수 : 총 23 항
(54) 발명의 명칭 GST-PI 유전자 조정을 위한 RNA 제제
(57) 요 약
본 발명은 RNA 간섭을 사용하는 인간 GST-π 의 발현을 조정하기 위한 화합물, 조성물 및 방법을 제공한다.
RNA 간섭 분자는 악성 종양과 같은 질환을 예방 또는 치료하기 위한 방법에서 사용될 수 있다. 핵산 분자는
a) 폴리뉴클레오티드 센스 가닥 및 폴리뉴클레오티드 안티센스 가닥을 가질 수 있고; b) 분자의 각각의 가닥은
15 내지 30 개 뉴클레오티드 길이이고; c) 안티센스 가닥의 15 내지 30 개 뉴클레오티드의 인접 영역은 GST-π
를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보적이고; d) 센스 가닥의 적어도 일부는 안티센스 가닥의 적어도 일부에 상보
적일 수 있고, 분자는 15 내지 30 개 뉴클레오티드 길이의 듀플렉스 영역을 갖는다.
대 표 도 - 도4
공개특허 10-2017-0093988
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(52) CPC특허분류
C07F 9/6533 (2013.01)
C12Q 1/02 (2013.01)
G01N 33/582 (2013.01)
C12N 2310/14 (2013.01)
C12N 2310/322 (2013.01)
C12N 2310/344 (2013.01)
C12N 2310/3515 (2013.01)
C12N 2310/531 (2013.01)
C12N 2320/30 (2013.01)
(72) 발명자
하르보르트 옌스
미국 92009 캘리포니아주 칼즈배드 라피스 로드
2432
다카하시 히로카즈
일본국 오사카후 이바라키시 시모호츠미 1-1-2 닛
토덴코 가부시키가이샤 나이
데라다 에리카
일본국 오사카후 이바라키시 시모호츠미 1-1-2 닛
토덴코 가부시키가이샤 나이
장 준
미국 92129 캘리포니아주 샌디에고 다크우드 로드
12166
아흐마디안 모하마드
미국 92009 캘리포니아주 칼즈배드 란쵸 콰르틸로
3230
(30) 우선권주장
62/184,239 2015년06월24일 미국(US)
62/266,664 2015년12월13일 미국(US)
공개특허 10-2017-0093988
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명 세 서
청구범위
청구항 1
하기와 같은 핵산 분자:
a) 분자는 폴리뉴클레오티드 센스 가닥 및 폴리뉴클레오티드 안티센스 가닥을 가짐;
b) 분자의 각각의 가닥은 15 내지 30 개 뉴클레오티드 길이임;
c) 안티센스 가닥의 15 내지 30 개 뉴클레오티드의 인접 영역은 GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열과
상보적임;
d) 센스 가닥의 적어도 일부는 안티센스 가닥의 적어도 일부에 상보적이고, 분자는 15 내지 30 개 뉴클레오티드
길이의 듀플렉스 영역을 가짐.
청구항 2
제 1 항에 있어서, 안티센스 가닥이 SEQ ID NO:1341 이고, 센스 가닥이 SEQ ID NO:1276 이거나, 또는 이의 화
학적으로 개질된 가닥인 핵산 분자.
청구항 3
제 1 항에 있어서, 안티센스 가닥이 SEQ ID NO:1305 이고, 센스 가닥이 SEQ ID NO:1240 이거나, 또는 이의 화
학적으로 개질된 가닥인 핵산 분자.
청구항 4
제 1 항에 있어서, GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보적인 안티센스 가닥의 15 내지 30 개 뉴클레오티
드의 인접 영역이 분자의 듀플렉스 영역에 위치하는 핵산 분자.
청구항 5
제 1 항에 있어서, GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보적인 안티센스 가닥의 15 내지 30 개 뉴클레오티
드의 인접 영역이 인간 GSTP1 의 서열로부터 선택되고, 인간 GSTP1 mRNA 가 SEQ ID NO:1 인 핵산 분자.
청구항 6
제 1 항에 있어서, GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열이 SEQ ID NO:1 의 5'UTR 위치 1 내지 249, SEQ ID NO:1
의 CDS 위치 250 내지 882, 및 SEQ ID NO:1 의 3'UTR 위치 883 내지 986 으로 이루어지는 군으로부터 선택되는
핵산 분자.
청구항 7
제 1 항에 있어서, 안티센스 가닥이 SEQ ID NO:609-1215 중 어느 하나로부터 선택되는 서열을 함유하는 핵산 분
자.
청구항 8
제 1 항에 있어서, 안티센스 가닥이 SEQ ID NO:1281-1345 중 어느 하나로부터 선택되는 서열을 함유하는 핵산
분자.
청구항 9
제 1 항에 있어서, 분자가 SEQ ID NO:1240 및 1305, SEQ ID NO:1265 및 1330, SEQ ID NO:1267 및 1332, SEQ ID
NO:1269 및 1334, 및 SEQ ID NO:1276 및 1341 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 안티센스 및 센스 가닥 쌍으
로 구성되는 핵산 분자.
공개특허 10-2017-0093988
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청구항 10
제 1 항에 있어서, 분자의 각각의 가닥이 18 내지 22 개 뉴클레오티드 길이인 핵산 분자.
청구항 11
제 1 항에 있어서, 듀플렉스 영역이 19 개 뉴클레오티드 길이인 핵산 분자.
청구항 12
제 1 항에 있어서, 폴리뉴클레오티드 센스 가닥 및 폴리뉴클레오티드 안티센스 가닥이 단일 가닥으로서 연결되
고, 루프에 의해 하나의 말단에서 연결된 듀플렉스 영역을 형성하는 핵산 분자.
청구항 13
제 1 항에 있어서, 분자가 블런트 말단을 갖는 핵산 분자.
청구항 14
제 1 항에 있어서, 분자가 하나 이상의 3' 오버행을 갖는 핵산 분자.
청구항 15
제 1 항에 있어서, 분자가 유전자 침묵화에 활성인 RNAi 분자인 핵산 분자.
청구항 16
제 1 항에 있어서, 분자가 유전자 침묵화에 활성인 dsRNA, siRNA, 마이크로-RNA, 또는 shRNA 인 핵산 분자.
청구항 17
제 1 항에 있어서, 분자가 GST-π 의 발현 억제에 활성인 핵산 분자.
청구항 18
제 1 항에 있어서, 분자가 100 pM 미만의 GST-π 의 녹다운에 대한 IC50 을 갖는 핵산 분자.
청구항 19
제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 핵산 분자 하나 이상 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성
물.
청구항 20
제 19 항에 있어서, 담체가 지질 분자 또는 리포좀인 조성물.
청구항 21
GST-π 발현과 연관된 질환의 치료 방법으로서, 제 19 항의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것
을 포함하는 방법.
청구항 22
제 21 항에 있어서, 질환이 악성 종양인 방법.
청구항 23
제 22 항에 있어서, 악성 종양이 GST-π 발현과 연관된 암, 돌연변이된 KRAS 를 발현하는 세포에 의해 야기되는
암, 육종, 섬유육종, 악성 섬유 조직구종, 지방육종, 횡문근육종, 평활근육종, 혈관육종, 카포시 육종, 림프관
육종, 활액막 육종, 연골육종, 골육종, 암종, 뇌종양, 두경부암, 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 십이지장암, 결
장직장암, 결장암, 간암, 췌장암, 담낭암, 담관암, 신장암, 요도암, 방광암, 전립선암, 고환암, 음경암,
자궁암, 난소암, 피부암, 뼈암, 백혈병, 악성 림프종, 상피성 악성 종양, 및 비-상피성 악성 종양으로 이루어지
공개특허 10-2017-0093988
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는 군으로부터 선택되는 질환에 존재하는 방법.
발명의 설명
기 술 분 야
발명의 기술 분야[0001]
본 발명은 핵산 기반 분자로 구성되는 생물의약품 및 치료제의 분야와 관련된다. 더 상세하게는, 본 발명은[0002]
인간 GST-π 의 발현을 조정하기 위해 RNA 간섭 (RNA interference) (RNAi) 을 이용하는 화합물 및 조성물과
관련된다.
서열목록[0003]
본 출원은 2015 년 12 월 23 일에 생성된 ASCII 파일로서 전자적으로 제출되는 파일명이 ND5123202WO_SL.txt[0004]
인 서열 목록을 포함하고, 그 크기는 442,955 바이트이고, 여기에 그 전체가 참조로서 인용된다.
배 경 기 술
다양한 인간 암 조직은 돌연변이된 KRAS 유전자의 출현과 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다. 일부 경우, 조[0005]
직은 또한 상승된 수준의 글루타티온 S-트랜스퍼라제 Pi (Glutathione S-Tranferase Pi) (GST-π) 발현을 나타
낸다. (Miyanishi et al., Gastroenterology, 2001, Vol. 121:865-874, Abstract) 예를 들어, 상승된 혈청
GST-π 수준이 다양한 위장 악성종양을 가진 환자에서 관찰되었다. (Niitsu et al., Cancer, 1989, Vol.63,
No. 2, pp. 317-323, Abstract)
GST-π 는 소수성 및 친전자성 화합물과 환원된 글루타티온과의 콘쥬게이션을 촉매작용함으로써 해독에 역할을[0006]
하는 효소의 GST 패밀리의 구성원이다. GST-π 발현은 siRNA 로 시험관 내에서 감소될 수 있다. (Niitsu et
al., US 2014/0315975 A1)
발명의 내용
해결하려는 과제
GST-π 발현의 억제를 위한 치료학은 고도로 강력한 siRNA 서열 및 구조를 필요로 할 것이다.[0007]
필요한 것은 GST-π 발현의 억제를 위한 siRNA 서열, 화합물 및 구조이다.[0008]
과제의 해결 수단
본 발명은 RNA 간섭을 사용하여 인간 GST-π 의 발현을 조정하기 위한 화합물, 조성물 및 방법에 관한 것이다.[0009]

일부 구현예에서, 본 발명은 GST-π 의 RNA 간섭 유전자 침묵화 (gene silencing) 를 위한 분자를 제공한다.[0010]

추가의 구현예에서, 본 발명의 구조, 분자 및 조성물은 질환을 예방 또는 치료하기 위한, 또는 악성 종양을 포[0011]
함하는, GST-π 와 연관된 조건 또는 장애의 증상을 경감하기 위한 방법에서 사용될 수 있다.
본 발명의 구현예는 하기를 포함한다:[0012]
하기와 같은 핵산 분자:[0013]
a) 분자는 폴리뉴클레오티드 센스 가닥 및 폴리뉴클레오티드 안티센스 가닥을 가짐; [0014]
b) 분자의 각각의 가닥은 15 내지 30 개 뉴클레오티드 길이임;[0015]
c) 안티센스 가닥의 15 내지 30 의 뉴클레오티드의 인접 영역은 GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열과[0016]
상보적임;
d) 센스 가닥의 적어도 일부는 안티센스 가닥의 적어도 일부에 상보적이고, 상기 분자는 15 내지 30 개 뉴클레[0017]
오티드 길이의 듀플렉스 영역을 가짐.
공개특허 10-2017-0093988
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일부 구현예에서, 핵산 분자는 분자의 듀플렉스 영역 내에 위치하는 GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보[0018]
적인 안티센스 가닥의 15 내지 30 개 뉴클레오티드의 인접 영역을 가질 수 있다.
부가적인 구현예에서, 핵산 분자는 GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보적인 안티센스 가닥의 15 내지 30[0019]
개 뉴클레오티드의 인접 영역을 가질 수 있다.
본 발명의 화합물은 SEQ ID NO:1 의 5'UTR 위치 1 내지 249, SEQ ID NO:1 의 CDS 위치 250 내지 882, 및 SEQ[0020]
ID NO:1 의 3'UTR 위치 883 내지 986 으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열
을 가질 수 있다.
특정 구현예에서, 핵산 분자의 각각의 가닥은 18 내지 22 개 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 핵산 분자의 듀[0021]
플렉스 영역은 19 개 뉴클레오티드 길이일 수 있다.
대안적인 형태에서, 핵산 분자는 단일 가닥으로서 연결된 폴리뉴클레오티드 센스 가닥 및 폴리뉴클레오티드 안[0022]
티센스 가닥을 가질 수 있고, 루프에 의해 하나의 말단에 연결된 듀플렉스 영역을 형성한다.
본 설명의 핵산 분자의 일부 구현예는 블런트 말단을 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 핵산 분자는 하나 이[0023]
상의 3' 오버행 (overhang) 을 가질 수 있다.
본 발명은 유전자 침묵화를 위해 활성인 RNAi 분자인 다양한 핵산 분자를 제공한다. 본 발명의 핵산 분자는[0024]
유전자 침묵화를 위해 활성인 dsRNA, siRNA, 마이크로-RNA, 또는 shRNA, 뿐 아니라 DNA-지정 RNA (ddRNA),
Piwi-상호작용 RNA (piRNA), 또는 반복 연관 siRNA (rasiRNA) 일 수 있다. 핵산 분자는 GST-π 의 발현 억
제를 위해 활성일 수 있다.
본 발명의 구현예는 추가로 100 pM 미만의 GST-π 의 녹다운 (knockdown) 을 위한 IC50 을 갖는 핵산 분자를 제[0025]
공한다.
본 발명은 추가로 본 발명의 핵산 분자 중 하나 이상을, 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 함유하는 조성물을[0026]
고려한다. 특정 구현예에서, 담체는 지질 분자 또는 리포좀일 수 있다.
본 발명의 화합물 및 조성물은 화합물 또는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, GST-π 관련[0027]
질환을 예방 또는 치료하기 위한 방법에서 유용하다.
본 발명의 방법은 악성 종양을 예방 또는 치료하기 위해 본 발명의 화합물을 이용할 수 있다. 악성 종양은[0028]
다양한 질환, 예를 들어, GST-π 발현과 연관된 암, 돌연변이된 KRAS 를 발현하는 세포에 의해 야기되는 암, 육
종, 섬유육종, 악성 섬유 조직구종, 지방육종, 횡문근육종, 평활근육종, 혈관육종, 카포시 육종, 림프관 육종,
활액막 육종, 연골육종, 골육종, 암종, 뇌종양, 두경부암, 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 십이지장암, 맹장암,
결장직장암, 직장암, 간암, 췌장암, 담낭암, 담관암, 항문암, 신장암, 요도암, 방광암, 전립선암, 고환암, 자궁
암, 난소암, 피부암, 백혈병, 악성 림프종, 상피성 악성 종양, 및 비-상피성 악성 종양에 존재할 수 있다.
도면의 간단한 설명
도 1: 도 1 은 SEQ ID NO: 1 을 보여주며, 이것은 986 개 뉴클레오티드 길이인, GenBank 수탁 번호[0029]
NM_000852.3 (hGSTP1) 에 기재된, 표적 인간 글루타티온 S -트랜스페라아제 pi (인간 GST-π) mRNA 의 핵산 서
열이다.
도 2: 도 2 는 GST-π siRNA 에 대한 생체 내 녹다운 효력을 보여준다. GST-π mRNA 의 용량 의존적 녹다
운을 도 2 에 제시된 바와 같이, GST-π 에 표적한 siRNA 와 함께 생체 내에서 관찰하였다.
도 3: 도 3 은 GST-π siRNA 에 의한 증식의 억제를 보여준다. 증식의 투여량-의존적 억제를 도 3 에 제시
된 바와 같이, GST-π 에 표적한 siRNA 와 함께 시험관 내에서 A549 세포주에서 관찰하였다.
도 4: 도 4 는 GST-π siRNA 에 대한 종양 억제 효과를 보여준다. 췌장암 이종이식 모델은 GST-π 에 표적
한 siRNA 의 0.75 mg/kg 에서 비교적 낮은 투여량으로 이용하였다. GST-π siRNA 는 유효한 종양 억제 효과
를 입증하였다.
발명을 실시하기 위한 구체적인 내용
본 발명은 GST-π 의 발현을 조정하기 위한 핵산 기반의 치료법을 위한 화합물, 조성물 및 방법에 관한 것이다.[0030]
공개특허 10-2017-0093988
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일부 구현예에서, 본 발명은 RNA 간섭에 활성인 분자 뿐 아니라, GST-π 의 발현을 침묵시킬 수 있는 구조 및[0031]
조성물을 제공한다.
본 발명의 구조 및 조성물은 악성 종양과 같은 다양한 질환을 예방 또는 치료하는데 사용될 수 있다. [0032]
추가의 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 치료적 RNAi 분자의 전달 및 섭취를 위한 조성물 뿐 아니[0033]
라 이의 사용 방법을 제공한다. 본 발명의 RNA-기반 조성물은 암과 같은 악성 종양을 예방 또는 치료하기
위한 방법에서 사용될 수 있다.
본 발명의 치료 조성물은 RNA 간섭에 활성인 핵산 분자를 포함한다. 치료 핵산 분자는 유전자 침묵화를 위[0034]
해 GSTP1 (GST-π) 에 표적될 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 발명은 소형 간섭 RNA (siRNA) 로서 활성일 수 있고, GST-π 유전자 발현을 조절 또는[0035]
침묵시킬 수 있는 다양한 분자를 제공한다.
본 발명의 siRNA 는 악성 종양을 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다.[0036]
본 발명의 구현예는 추가로 악성 종양의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에 대한 본 발명의 siRNA 의 전달[0037]
을 위한 비히클, 제형, 또는 지질 나노입자 제형을 제공한다. 본 발명은 추가로 포유동물에게 치료제로서
siRNA 를 투여하기 위한 방법을 고려한다.
본 발명의 치료 분자 및 조성물은 화합물 또는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, GST-π 관[0038]
련 질환을 예방 또는 치료하기 위해 RNA 간섭에 사용될 수 있다.
본 발명의 방법은 악성 종양을 예방 또는 치료하기 위해 본 발명의 화합물을 이용할 수 있다. 악성 종양은[0039]
다양한 질환, 예를 들어, GST-π 를 고도로 발현하는 암, 돌연변이된 KRAS 를 발현하는 세포에 의해 야기된 암,
육종, 섬유육종, 악성 섬유 조직구종, 지방육종, 횡문근육종, 평활근육종, 혈관육종, 카포시 육종, 림프관
육종, 활액막 육종, 연골육종, 골육종, 암종, 뇌종양, 두경부암, 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 십이지장암, 결
장직장암, 간암, 췌장암, 담낭암, 담관암, 신장암, 요도암, 방광암, 전립선암, 고환암, 자궁암, 난소암,
피부암, 백혈병, 악성 림프종, 상피성 악성 종양, 및 비-상피성 악성 종양에 존재할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 치료 분자의 조합은 GST-π 유전자 발현의 침묵화 또는 억제에 사용될 수 있다.[0040]

본 발명은 다양한 RNAi 분자를 제공하며, 여기에서 각 분자는 폴리뉴클레오티드 센스 가닥 및 폴리뉴클레오티드[0041]
안티센스 가닥을 갖고; 분자의 각 가닥은 15 내지 30 개 뉴클레오티드 길이를 갖고; 안티센스 가닥의 15 내지
30 개 뉴클레오티드의 인접 영역 (contiguous region) 은 GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보적이고; 센
스 가닥의 적어도 일부분은 안티센스 가닥의 적어도 일부분에 상보적이고, 분자는 15 내지 30 개 뉴클레오티드
길이의 듀플렉스 영역을 갖는다.
본 발명의 RNAi 분자는 분자의 듀플렉스 영역에 위치하는, GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보적인 안티[0042]
센스 가닥의 15 내지 30 개 뉴클레오티드의 인접 영역을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, RNAi 분자는 GST-π 를 인코딩하는 mRNA 의 서열에 상보적인 안티센스 가닥의 15 내지 30 개[0043]
뉴클레오티드의 인접 영역을 가질 수 있다.
본 발명의 구현예는 또한 이를 필요로 하는 포유동물에서 악성 종양의 하나 이상의 증상의 예방, 치료 또는 완[0044]
화, 또는 악성 종양을 발달시킬 위험의 감소, 또는 악성 종양의 개시의 지연을 위한 방법을 제공할 수 있다.
GST-π 및 RNAi 분자[0045]
도 1 은 GenBank 수탁 번호 NM_000852.3 (hGSTP1) 에 기재되고, 986 개 뉴클레오티드 길이인 (SEQ ID NO: 1),[0046]
예시 표적 인간 글루타티온 S-트랜스페라아제 pi (인간 GST-π) mRNA 의 핵산 서열을 나타낸다.
당업자는 보고된 서열이 시간의 흐름에 따라 변화할 수 있고 본원에서 핵산 분자에 필요한 임의의 변화를 그에[0047]
맞춰 포함할 수 있다는 것을 이해할 것이다.
본 발명의 구현예는 작은 핵산 분자를 사용하는 GST-π 발현의 유전자 침묵화를 위한 조성물 및 방법을 제공할[0048]
수 있다. 핵산 분자의 예는 RNA 간섭에서 활성인 분자 (RNAi 분자), 짧은 간섭하는 RNA (siRNA), 이중-가닥
공개특허 10-2017-0093988
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RNA (dsRNA), 마이크로-RNA (miRNA), 및 짧은 헤어핀 RNA (shRNA) 분자, 뿐만 아니라 DNA-지향되는 RNA
(ddRNA), Piwi-상호작용 RNA (piRNA), 및 리피트 (repeat) 연합된 siRNA (rasiRNA) 를 포함한다. 이러한
분자들은 GST-π 유전자 발현에 대한 RNA 간섭을 매개할 수 있다.
본원에서 개시된 조성물 및 방법은 또한 대상체에서 다양한 종류의 악성 종양을 치료하는데 사용될 수 있다.[0049]
본 발명의 핵산 분자 및 방법은 GST-π 를 인코딩하는 유전자의 발현을 하향 조절하는데 사용될 수 있다.[0050]
본 발명의 조성물 및 방법은 GST-π 단백질 및/또는 GST-π 단백질을 인코딩하는 유전자, GST-π 와 관련되는[0051]
질환, 병태 또는 장애, 예컨대 악성 종양의 유지 및/또는 발달과 관련되는 단백질 및/또는 GST-π 를 인코딩하
는 유전자의 발현을, 독립적으로 또는 조합으로, 조정 또는 조절할 수 있는 하나 이상의 핵산 분자를 포함할 수
있다.
본 발명의 조성물 및 방법은 GST-π 의 예시적인 서열과 관련하여 기재된다. 당업자는 본 발명의 다양한 양[0052]
상 및 구현예가 임의의 관련된 GST-π 유전자, 서열, 또는 변이체, 예컨대 동족체 유전자 및 전사체 변이체,
및, 임의의 GST-π 유전자와 관련된 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) 을 포함하는, 다형성에 관한 것이라는 점
을 이해할 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 GST-π 유전자, 예를 들어 인간 GST-π 의 발현을 하향조절하는[0053]
이중-가닥 짧은 간섭하는 핵산 (siRNA) 분자를 제공할 수 있다.
본 발명의 RNAi 분자는 GST-π 및 임의의 상동성 서열을, 예를 들어, 상보적 서열을 사용하여 또는 추가의 표적[0054]
서열을 제공할 수 있는 비-표준적 (non-canonical) 염기쌍, 예를 들어, 미스매치 (mismatch) 및/또는 워블
(wobble) 염기쌍을 편입시킴으로써, 표적으로 삼을 수 있다.
미스매치가 확인되는 경우에, 비-표준적 염기쌍, 예를 들어, 미스매치 및/또는 워블 염기가 사용되어 하나 초과[0055]
의 유전자 서열을 표적으로 삼는 핵산 분자를 생성할 수 있다.
예를 들어, 비-표준적 염기쌍 예컨대 UU 및 CC 염기쌍이 사용되어 서열 상동성을 공유하는 상이한 GST-π 표적[0056]
에 관한 서열을 표적화할 수 있는 핵산 분자를 생성할 수 있다. 따라서, RNAi 분자는 상동성 유전자 사이에
보존되어 있는 뉴클레오티드 서열을 표적으로 삼을 수 있고, 단일 RNAi 분자가 사용되어 하나 초과의 유전자의
발현을 억제할 수 있다.
일부 양상에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 GST-π mRNA 에 대해 활성인 RNAi 분자를 포함하며, 여기에서 RNAi[0057]
분자는 GST-π 서열을 인코딩하는 임의의 mRNA 에 상보적인 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 공개의 RNAi 분자는 GST-π RNA 에 대한 활성을 가질 수 있으며, 여기에서 RNAi 분자는 변[0058]
이체 GST-π 인코딩 서열을 갖는 RNA, 예를 들어, 악성 종양과 관련되는 것으로 당업계에 알려진 돌연변이체
GST-π 유전자에 상보적인 서열을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명의 RNAi 분자는 GST-π 유전자의 뉴클레오티드 서열과 상호작용하고 GST-π 유전자 발[0059]
현의 침묵화를 매개할 수 있는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
GST-π mRNA 를 표적으로 삼는 본 발명의 RNAi 분자의 예가 표 1 및 2 에서 보여진다.[0060]
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표 1: GST-π 에 관한 RNAi 분자 서열[0061]
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표 1 에 관한 기호설명: 대문자 A, G, C 및 U 는 각각 리보-A, 리보-G, 리보-C 및 리보-U 를 지칭한다. 소[0084]
문자 a, g, c, t 는 각각 2'-데옥시-A, 2'-데옥시-G, 2'-데옥시-C 및 티미딘을 지칭한다.
표 2: GST-π 에 관한 RNAi 분자 서열[0085]
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표 2 에 관한 기호설명: 대문자 A, G, C 및 U 는 각각 리보-A, 리보-G, 리보-C 및 리보-U 를 지칭한다. 소[0090]
문자 a, g, c, t 는 각각 2'-데옥시-A, 2'-데옥시-G, 2'-데옥시-C 및 티미딘을 지칭한다.
예를 들어, 본 발명의 siRNA 는 SEQ ID NO:1341 인 안티센스 가닥, 및 SEQ ID NO:1276 인 센스 가닥, 또는 이[0091]
의 화학적으로 개질된 가닥을 가질 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 siRNA 는 SEQ ID NO:1305 인 안티센스 가닥, 및 SEQ ID NO:1240 인 센스 가닥, 또는 이[0092]
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의 화학적으로 개질된 가닥을 가질 수 있다.
화학적 개질은 가닥 내의 임의의 위치 중의 임의의 뉴클레오티드 상에 2'-OMe 치환기, 뿐 아니라 당업계에 공지[0093]
된 다른 개질을 포함할 수 있다.
GST-π 를 조정하고 악성 종양을 치료하기 위한 방법[0094]
본 발명의 구현예는 GST-π 및/또는 GST-π 단백질의 발현을 하향 조절 또는 억제하는데 사용될 수 있는 RNAi[0095]
분자를 제공할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNAi 분자는 악성 종양과 같은 질환 또는 병태와 관련될 수 있는 GST-π 일배체형[0096]
다형성으로부터 비롯되는 GST-π 및/또는 GST-π 단백질의 발현을 하향 조절 또는 억제하는데 사용될 수 있다.
GST-π 단백질 또는 mRNA 수준의 모니터링을 사용하여 유전자 침묵화를 특성규명하고, 본 발명의 화합물 및 조[0097]
성물의 효능을 확인할 수 있다.
본 공개의 RNAi 분자는 개별적으로, 또는 다른 siRNA 와의 조합으로 하나 이상의 유전자의 발현을 조정하기 위[0098]
해 사용될 수 있다.
본 공개의 RNAi 분자는 개별적으로, 또는 조합으로, 또는 다른 알려진 약물과 함께 악성 종양을 포함하는 GST-[0099]
π 와 관련되는 질환의 예방 또는 치료 또는 병태 또는 장애의 증상의 완화를 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 RNAi 분자는 GST-π 의 발현을 서열-특이적 방식으로 조정 또는 억제하는데 사용될 수 있다.[0100]
본 공개의 RNAi 분자는 가이드 가닥 (guide strand) 을 포함할 수 있으며, 가이드 가닥의 일련의 인접 뉴클레오[0101]
티드는 GST-π mRNA 에 적어도 부분적으로 상보적이다.
특정 양상에서, 악성 종양은 본 발명의 RNAi 분자를 사용하여 RNA 간섭에 의해 치료될 수 있다.[0102]
악성 종양의 치료는 적합한 세포 기반 모델, 뿐만 아니라 생체외 또는 생체내 동물 모델에서 특성규명될 수 있[0103]
다.
악성 종양의 치료는 병든 조직의 세포에서의 GST-π mRNA 의 수준 또는 GST-π 단백질의 수준을 확인함으로써[0104]
특성규명될 수 있다.
악성 종양의 치료는 병든 장기 또는 조직의 비-침습적 의료 스캐닝에 의해 특성규명될 수 있다.[0105]
본 발명의 구현예는 그것을 필요로 하는 대상체에서 GST-π 관련되는 질환 또는 병태의 증상을 예방, 치료, 또[0106]
는 완화하는 방법을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체에서 악성 종양의 증상을 예방, 치료, 또는 완화하는 방법은 대상체에게 본 발명의[0107]
RNAi 분자를 투여하여 대상체 또는 유기체에서 GST-π 유전자의 발현을 조정하는 것을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 세포 또는 유기체를 본 발명의 RNAi 분자와 접촉시킴으로써 세포 또는 유기체에서[0108]
GST-π 유전자의 발현을 하향 조절하는 방법을 고려한다.
RNA 간섭[0109]
RNA 간섭 (RNA Interference) (RNAi) 은 짧은 간섭하는 RNA (siRNA) 에 의해 매개되는 동물에서의 서열-특징적[0110]
전사후 유전자 침묵화를 지칭한다. 예를 들어, Zamore et al., Cell, 2000, Vol. 101, pp. 25-33; Fire et
al., Nature, 1998, Vol. 391, pp. 806811; Sharp, Genes